什么是假病毒？

假病毒（Pseudovirus）是指经过改造后的病毒颗粒。将病毒颗粒进行人工改造，保留其部分特性的同时，成为无致病性的假病毒颗粒。在病毒性传染病防治过程中，通过小分子、中和抗体等抑制病毒入侵细胞是关键的一环，假病毒在这一过程的研究中具有独特的优势。相较于“真”病毒，其安全性高，即使是高致病性病毒对应的假病毒，也不需要在高生物安全等级（BSL3/ BSL4）实验室操作。

VSV病毒介绍

VSV是Vesicular Stomatitis Virus的缩写，中文名称为“水疱性口炎病毒”，属于水疱病毒属，弹状病毒科（Rhabdoviridae），其外形如同其名字呈现出子弹型。

VSV的基因组结构

野生型的VSV是一种由包膜病毒，其病毒体结构呈弹状或杆状，拥有一条单链负义RNA基因组（-ssRNA），并且其复制依赖病毒的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）。含有5种结构蛋白：核蛋白（N），磷酸化蛋白质（P），RNA聚合酶（L），基质蛋白（M）以及糖蛋白（G）。

图片来源：知乎

VSV感染靶细胞时，其中的G糖蛋白诱导细胞发生内吞作用，帮助病毒侵入细胞。侵入细胞后，VSV的组装发生在质膜上，病毒粒子从细胞表面出芽，在出芽时VSV 获得一个包膜，该包膜包含源自质膜的脂质双层和G 蛋白三聚体的刺突蛋白。这一包膜过程的显著特性之一是，VSV病毒粒子对可掺入病毒包膜的膜蛋白类型没有特别的选择性，当细胞与VSV和其他包膜病毒共感染时，VSV很容易包被其他病毒的膜蛋白。VSV病毒粒子在没有G糖蛋白的情况下可以出芽，再加上异源糖蛋白可以掺入VSV的性质，由此诞生了重组VSV病毒(rVSV)，其中糖蛋白G 的基因被报告基因取代，例如 GFP、RFP等荧光蛋白、萤光素酶或其他易于检测的分泌酶（SEAP；分泌的人胎盘碱性磷酸酶）等，成为rVSV-ΔG，而其包膜蛋白来自待研究的异源病毒。

应用场景：

1.病毒入侵机制研究​
如通过替换异源包膜蛋白（如新冠病毒S蛋白），模拟高危病毒入侵过程，解析受体结合（如ACE2）及膜融合机制，规避高等级实验室需求。

2.疫苗与药物开发​

疫苗载体：如首个获批的埃博拉疫苗rVSV-ZEBOV（V920），用ZEBOV GP蛋白替换VSV-G，诱导强效免疫应答。

中和抗体评价：假病毒中和试验（pVNT）可快速评估疫苗或抗体对变异株（如Delta、Omicron）的保护效果。

3.诊断质控品开发​
携带新冠病毒靶基因（ORF1ab、N基因）的VSV假病毒，可作为核酸检测阳性对照，验证试剂灵敏度及操作规范性，避免活病毒使用风险。

4.抗病毒药物筛选​
假病毒结合报告基因，高通量筛选阻断病毒入侵的抑制剂或抗体，如针对S蛋白-ACE2结合的小分子药物。

DIFF 假病毒系统

迪福润丝生物通过在VSV载体中插入报告基因eGFP或Luciferase，用其他病毒的囊膜蛋白替换VSV载体的关键蛋白，形成了各种可定制化的假病毒。

相较于ELISA等方法，VSV假病毒检测方法具有以下优势：

l 高通量：增强了结果读取的便捷性、客观性，适合批量检测；

l 可复制性：更高的仿真度，可以更好地模拟感染的真实过程，增强结果可信性；

l 降低生物安全等级：可降低生物安全等级要求，筛选安全等级要求高的抗病毒药物。

服务案例：

图2.疫苗鼻腔免疫后滴鼻途径感染VSV新冠假病毒活体成像

图3.疫苗鼻腔免疫小鼠后滴鼻途径感染VSV新冠假病毒后存活率

图4.VSV狂犬假病毒荧光斑点观测结果

图5.VSV-H5N1假病毒荧光斑点观测结果

图6.VSV-H5N1假病毒中和实验抑制率曲线

图7.VSV-SFTSV假病毒荧光斑点观测结果

基于VSV假病毒的中和抗体检测

迪福润丝生物自有的CRO服务平台「DIFF+」可利用DIFF VSV假病毒提供基于荧光斑点计数法的中和抗体检测服务，检测流程（图4）如下：

图9. 中和抗体检测流程图

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DIFF VSV假病毒产品及服务信息：

参考文献：

[1]Whitt MA. Generation of VSV pseudotypes using recombinant ΔG-VSV for studies on virus entry, identification of entry inhibitors, and immune responses to vaccines. J Virol Methods. 2010 Nov;169(2):365-74.

[2]Nie, J., Li, Q., Wu, J. et al. Quantification of SARS-CoV-2 neutralizing antibody by a pseudotyped virus-based assay. Nat Protoc 15, 3699–3715 (2020).