Hoechst 33258/ Hoechst 33342:细胞核染色的重要染料-技术前沿-资讯-生物在线

Hoechst 33258/ Hoechst 33342:细胞核染色的重要染料

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-11-21T00:00 (访问量:12653)

产品介绍

Hoechst 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光,对细胞的毒性较低。Hoechst常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测,也可以用于普通的细胞核染色,或常规的DNA染色。

 

技术原理

DNA 结合:Hoechst能够特异性地与双链DNA结合,通过插入到DNA的小沟中,形成稳定的复合物。这种结合方式使得染料的荧光特性发生改变,在特定波长的激发光下发出蓝色荧光。

荧光特性:Hoechst在紫外光或近紫外光激发下发出蓝色荧光,其激发波长通常在350 nm左右,发射波长在460nm左右。这种蓝色荧光具有较高的亮度和对比度,能够清晰地显示细胞核的形态和结构。

 

Hoechst 33258/ Hoechst 33342的区别

Hoechst 33258在活细胞中DNA的AT序列富集区域的小沟处与DNA结合,广泛用于细胞凋亡检测,染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。两者区别不大,但是Hoechst 33342对细胞的毒性作用更小一些,因此一般Hoechsts 33258用于细胞固定后再染色,而Hoechst 33342则可以对活细胞直接进行染色。

 

使用方法

1. 用PBS或合适的缓冲液制备0.5 - 10 μg/mL Hoechst 33258染色液。

2. 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液,约1/10细胞培养基体积,必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液,对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 

3. 在 37℃培养细胞10 - 20 min。

4. 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

5. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm,发射波长460 nm。

 

结果展示

正常细胞的细胞核被Hoechst染色后,呈现出明亮的蓝色荧光。细胞核的形态和结构清晰可见。

 

常见问题

Q:如何做到同时染色溶酶体和细胞核的?

A:建议用Hoechst 33258/ Hoechst 33342染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。

Q:DAPI和Hoechst染料相当类似,如何二选一?
A:DAPI是非常通用的蓝色荧光染料,用于细胞核复染。对固定和透化的细胞/组织,具有非常明亮的细胞核标记。然而,此染料被认为是半渗透至不渗透的染料,用于活细胞染色的结合不一致。Hoechst 33342是一种细胞膜渗透性的染料,具有同DAPI的结合机制和荧光特征。非常适合用于活细胞成像,效果就如同DAPI用于固定细胞染色。

 

相关产品

产品名称

产品货号

规格

Hoechst 33258

40729ES10/76/80

10mg/500mg/1g

Hoechst 33258 Stain Solution (1mg/mL)
Hoechst 33258 染液(1mg/mL)

40730ES03

1ml

Hoechst 33342

40731ES10

10mg

Hoechst 33342 Stain Solution(1mg/ml)
Hoechst 33342 染液(1 mg/mL)

40732ES03

1 mL

 

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