PCR产物酶法纯化:提升你的Sanger测序数据质量!-技术前沿-资讯-生物在线

PCR产物酶法纯化:提升你的Sanger测序数据质量!

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-11-29T00:00 (访问量:9064)

01 PCR产物的纯化是获得高质量模板的核心

Sanger测序是一个高度精确的技术,可以逐个碱基读出 DNA 序列,对模板的纯净度有着极高的要求。然而,PCR产物中的游离引物和核苷酸往往会干扰测序结果。如何在不损耗珍贵样本的前提下,获取干净、高质量的模板,是一个急需解决的难题。

图1.Sanger测序原理

 

在这种情况下,PCR产物的纯化成为了众多科研工作者的首选策略。传统的PCR纯化方法,如乙醇醋酸钠纯化、磁珠纯化或柱纯化,虽然有效,但往往耗时耗力,且在操作过程中容易损失样本。对于样本量有限的研究者来说,这无疑是一个相当棘手的问题。

翌圣生物提供的酶法PCR纯化法有着非常简单直接的工作流程,只有一个移液步骤。只需将核酸外切酶(Exonuclease I)碱性磷酸酶加入PCR产物中,并在37℃静置15~30 min,即可完成纯化。这种方法不仅操作简便,而且大大减少了样本的损失,特别适合样本量有限的研究。

 

02 PCR酶法纯化是如何降解游离的引物和核苷酸,而不影响dsDNA目的产物

关键在于Exonuclease I!

Exonuclease I是一种对变性或单链脱氧核糖核酸具有高度选择性的核酸外切酶,作用时,Exonuclease I从引物(单链聚脱氧核糖核苷酸)的3 羟基端开始攻击,随后逐步释放出脱氧核糖核苷5 ' -单磷酸盐,但末端二核苷酸会保持完整。Exonuclease I对双链DNA或RNA无活性,因此不会降解目标产物dsDNA。接着,碱性磷酸酶将反应体系中的核苷酸去磷酸化,去磷酸化意味着反应体系中dNTP失去活性,从而不会影响测序反应。这是因为测序反应体系中的dNTP:ddNTP需要遵循特定比例,任何比例的偏差都可能引起不可预测的测序结果。(点击链接,获取更多Exonuclease I产品详情

图2.Exonuclease I反应原理

03 PCR酶法纯化会影响后续的测序吗?

答案是:不会!

只需将反应混合物加热至80℃并保持15 min,即可使酶失活,得到干净的PCR扩增产物,直接用于测序反应。整个过程快速高效,无需额外的纯化步骤,也不会造成样本的损失。

 

翌圣PCR产物纯化解决方案

产品名称

产品货号

规格

Exonuclease I(20 U/μL)

14535ES

1000 U/5000 U

Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/µL)

10322ES

250 U

 

翌圣生物科技(上海)股份有限公司 商家主页

地 址: 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元

联系人: 李自转

电 话: 400-6111-883、021-34615995-8075

传 真: 021-34615995-188

Email:lizizhuan@yeasen.com

相关咨询
ADVERTISEMENT