支原体污染事件会导致细胞的物理和化学性质发生变化，可能导致细胞产物的减少或改变，甚至可能导致不安全的生物药物。因此，在开发和生产过程中检测支原体污染是世界各地监管机构的要求。同时，对于支原体的检测方法，国家监管机构和国家药典法规仍将培养法作为“金标准”。然而，随着近年来细胞治疗/基因治疗的快速发展，需要更长时间的培养方法已经无法满足新鲜剂型的CAR- T细胞、干细胞以及溶瘤病毒和腺病毒等产品对支原体检测的需求。因此，支原体快速检测方法（如NAT法）应运而生，发展迅速，现已被纳入《欧洲药典》和《日本药典》。同时，国家监管部门（包括《中国药典》）明确提到，NAT方法经过适当验证后，可用于补充或取代药典中支原体检测（放行）的方法。
支原体是细胞培养过程中常见的外源性污染物，对于生物制品生产企业来说，支原体污染是非常严重的问题，给生物制品带来难以估量的安全隐患。因此，开展支原体检查是细胞质量控制微生物学安全性评价体系中的一项重要内容。针对支原体对细胞培养带来的巨大不良影响，在中国药典、美国药典、欧洲药典和日本药典中都要求，对主细胞库、工作细胞库、病毒种子批以及病毒疫苗等执行支原体检查。
目前，欧洲药典，日本药典以及美国药典都已收录NAT方法作为支原体检测方法之一。但是，如果企业需要将使用NAT方法进行支原体检测结果写入申报材料中，根据各国监管机构的要求需要对NAT方法进行全面的验证，并且与传统药典方法（直接培养法和指示细胞培养法）进行比对研究以证明其等同于或者优于培养法。
NAT方法虽然为定量的检测方法，但是其在支原体检测的应用则属于定性检测项目。根据中国药典、美国药典、欧洲药典或日本药典建议，验证的内容主要包括专属性（Specificity）、检测限（Detection limit）和耐用性（Robustness）三个方面。
特异性:指分析方法在存在其他成分(如外来细菌污染、细胞基质和宿主细胞)的情况下准确测定被测物质的能力。目的是确保支原体核酸的检测。同时也应排除非支原体核酸检测的可能性，包括与支原体密切相关的革兰阳性菌Clostridium、Lactobacillus、Streptococcus、宿主细胞DNA、人细胞DNA等。
检出限:指被测样品中所能检出的目标物质的最小量。在本检测中，检出限仅作为限检指标和定性鉴定的依据，不需要作为准确值进行准确量化。在设置浓度时确认阴性/阳性对照。在欧洲药典中，要求每种支原体每种稀释浓度有24个检测数据，且检测阳性率必须达到95%以上为检测限。Eurofins BPT现有支原体qPCR方法的检出限≤10 CFU/mL或≤10 IU/mL。
耐用性:是指测量条件发生微小变化时，测量结果不受影响的程度。在正常和预期的操作条件下(仪器或试剂可能不同)分析等量均质样品时获得的测试结果的再现性。包括:试剂用量、样品保存方法、不同人员操作、不同时间操作、不同仪器选择等。
为什么选择翼和生物支原体检测试剂盒?
翼和生物委托第三方专业检测机构完成了细胞支原体检测试剂盒方法学验证！该验证项目依据欧洲药典推荐的核酸检测支原体检查法验证方案，对试剂盒的专属性、检测限和耐用性进行了验证。结果表明，松茸生物细胞支原体检测试剂盒这三方面特性均符合要求，检测灵敏度为10cfu/mL，可替代培养法，用于细胞存储库、细胞治疗用途的细胞和生物制品中的支原体污染检测和放行检测。