MesenPlify™ 干细胞扩增培养基技术资料(第三期)-技术前沿-资讯-生物在线

MesenPlify™ 干细胞扩增培养基技术资料(第三期)

作者:广州市艾贝泰生物科技有限公司 2024-11-12T00:00 (访问量:9691)

本期我们重点讲一下MesenPlifyTM无血清无异种成分人类间充质干细胞扩增培养基的使用指南,本篇中主要讲解的是原代MSC分离培养,具体以脐带组织块法分离原代MSC操作为例。

 

原代MSC分离培养

步骤一 准备材料

培养基:新鲜配置的MesenPlifyTM sXF完全培养基(加1%双抗)。

培养皿:准备多个15cm皿进行细胞培养。

消毒剂:医用消毒酒精(75%)。

洗涤液:生理盐水(无菌,加 1%双抗)。

工具盒:包括剪刀、镊子、手术刀、移液器、离心管(50mL)等。

脐带样本:新鲜的脐带泡在含有1%双抗的PBS里4℃保存运输(最好在获得后尽快处理)。

 

步骤二 消毒处理

01  吸弃脐带保存液。

02  使用75%的医用消毒酒精完全浸没脐带,浸泡2分钟以确保消毒效果。

 

步骤三 清洗脐带

01  用无菌生理盐水清洗脐带2-3次,确保彻底去除残留的脐血。

02  每次清洗后均应用无菌的工具保持脐带在无菌环境中。

 

步骤四 剪切处理

01  将脐带剪成约2-3cm的小段。

02  用无菌生理盐水再清洗2-3次,确保去除残留的脐血。

 

步骤五 分离华通氏胶

01  沿静脉剪开脐带,尽量去除2条静脉壁与1条动脉壁。

02  轻轻分离华通氏胶,注意避免损伤表皮,使用弯头手术剪将华通氏胶至2-3mm³大小的组织方块,胶质面向下,平铺在150mm细胞培养皿上,每皿10-12片方块。

步骤六 细胞培养

01  由组织块正上方缓慢滴加37℃复温的MesenPlifyTM sXF完全培养基,每个皿滴加15mL左右,注意不要让组织块飘起来。

02  放入37°C、5%CO₂和饱和湿度的培养箱中培养。

 

步骤七 换液注意:每2-3天换液一次)

01  每日观察是否有细胞从组织块爬出。

02  换液时,将培养瓶倾斜,同时避免组织块滑动,小心吸弃上清液。

03  慢慢加入37℃复温的MesenPlifyTM sXF完全培养基,滴加培养基的手法与上述相同。

04  将细胞培养皿放回培养箱继续培养。

05  正常换液培养,直到观察到组织块周围有梭形细胞爬出时,使用灭菌后的镊子夹除组织块,此时如果再次换液,MesenPlifyTM sXF完全培养基的用量可改为为18-20mL/皿。

 

步骤八 传代 注意:在接种后第12天左右)

01  观察细胞的生长状况,当细胞汇合度达到约80%时,可进行消化传代。

02  传代时细胞的接种密度为6000/cm2,请依据所需的细胞量,选择合适大小的细胞培养皿。(具体操作步骤可参考下期“hMSCs的传代培养”

 

注意事项:

所有操作都应在无菌条件下进行,避免任何非无菌材料的接触。

 

 

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