聚焦细胞凋亡,认识Annexin V的价值-技术前沿-资讯-生物在线

聚焦细胞凋亡,认识Annexin V的价值

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-11-21T00:00 (访问量:16942)

介绍

细胞凋亡(Apoptosis)通常是指机体细胞在发育进程中或者受到某些特定因素影响时,经由细胞内基因及其产物的调控而引发的一种程序性细胞死亡现象。在细胞凋亡的途径里,各个事件的发生具有时序性,依先后顺序逐一出现,最终促成凋亡小体的呈现,接着细胞便发生凋亡。细胞凋亡在胚胎发育与形态发生、维持组织内正常细胞群体的稳定、机体的防御及免疫反应、疾病或中毒引发的细胞损伤、老化以及肿瘤的发生发展等方面都起着至关重要的作用,并且具备潜在的治疗价值。

 

检测原理

正常细胞膜的磷脂分布是不对称的,活细胞中磷脂酰丝氨(phosphatidylserine, PS)位于细胞膜的内表面,细胞凋亡时,细胞膜发生变化,PS从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。Annexin V是一种对PS有高度亲和力的、钙依赖性的磷脂结合蛋白,Annexin V可以特异性地识别凋亡细胞表面的PS,而活细胞的PS位于细胞膜的内表面,无法与Annexin V特异性结合。

坏死细胞的PS也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面,Annexin V也能识别坏死细胞表面的PS,所以Annexin V无法区分坏死细胞和凋亡细胞。而PI染料能够与细胞内的DNA结合,区分坏死细胞和活细胞。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整,PI染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与DNA结合,所以PI染料无法标记凋亡细胞和活细胞,而PI染料却能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合,坏死细胞内PI染料被488nm激光激发后会发射红荧光,被相应通道接收。所以Annexin V和PI同时使用,就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和晚期凋亡或坏死细胞。

 

流式细胞术检测

FITC最大激发波长为488 nm,最大发射波长525 nm,FITC的绿色荧光在FL1通道检测;PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm,PI的红色荧光在FL2或FL3通道检测。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图,FITC为横坐标,PI为纵坐标。典型的实验中,细胞可以分成三个亚群,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色荧光双重染色。

 

常见问题

Q:Annexin V 细胞凋亡检测可以应用到植物或是细菌(原核生物)吗?

A:可以,但是需要制备原生质体,因为植物细胞或是细菌(原核生物)含有细胞壁,具体的染液使用剂量只需浸没细胞即可,染色时间对于不同细胞有一定的不同。

Q:实验结果如何判断?

A:活细胞(Annexin V-/PI-)、早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)、晚期凋亡细胞和坏死细胞呈现双阳性(Annexin V+/PI+)、裸核(Annexin V-/PI+)。

Q:Annexin V和TUNEL有什么区别?

A:末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 是一种染色方法,用于识别细胞内 DNA 片段化位点——晚期细胞凋亡的标志性特征。

Annexin V 染色通过结合由于细胞膜不对称性丧失而暴露在细胞外的 PS 残基来识别细胞凋亡的早期阶段。

Q:是否可以仅使用Annexin V-FITC进行检测而不检测PI?

A:可以的。对于特殊的检测样本,如红细胞无细胞核,或使用药物Doxorubicin(阿霉素)对PI检测存在干扰,对于这两种情况可以仅使用Annexin V-FITC进行检测。

 

产品详情

产品名称

货号

规格

Annexin V-FITC/7-AAD 细胞凋亡检测试剂盒

40311ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

40302ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒

40310ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒 

40303ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD 细胞凋亡检测试剂盒

40313ES60

100T

Annexin V-YSFluor™ 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒

40305ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-YSFluor™ 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒

40304ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-YSFluorTM 647/7-AAD 细胞凋亡检测试剂盒

40312ES20/50/60

20T/50T/100T

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)

40306ES20/50/60

20T/50T/100T

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(YSFluor™ 488)

40307ES20/50/60

20T/50T/100T

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(YSFluor™ 640)

40308ES20/50/60

20T/50T/100T

 

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