精准诊断,从逆转录开始——高效逆转录酶助力RT-qPCR-技术前沿-资讯-生物在线

精准诊断,从逆转录开始——高效逆转录酶助力RT-qPCR

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-11-21T00:00 (访问量:10240)

逆转录酶(Reverse Transcriptase,简称RT酶)是一种能够将RNA模板转化为互补DNA(cDNA)的酶。在分子生物学研究中,逆转录酶的应用极为广泛,特别是在分子诊断领域发挥着不可或缺的作用。通过逆转录过程,可以将病毒的RNA基因组转换为cDNA,之后便可以利用如qPCR等技术对其进行扩增和检测。这一特性使得对诸如艾滋病、甲型流感以及乙型流感这类RNA病毒进行准确诊断成为可能。

追求更快速、更灵敏且操作更为简便的RT-qPCR分子诊断试剂已成为当前的主要发展趋势。作为RT-qPCR过程中的关键原料之一,逆转录酶需要具备更快的逆转录速度、更高的合成产量以及更好的耐热性能。为了获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶,翌圣生物在M-MLV的基础上通过基因改造,开发出RNase H活性更低,热稳定性更高,持续合成能力更强的Hifair® 系列逆转录酶。

 

翌圣Hifair®系列逆转录酶

目前翌圣有多种Hifair®系列逆转录酶,并且可提供各种剂型的产品,包含单酶、预混液,您可以根据实际需求进行选择。下表罗列了翌圣不同逆转录酶的特点和推荐应用。

 

表1.翌圣逆转录酶选择指南

产品名称(货号)

产品特点

推荐应用

Hifair® III逆转录酶(11111ES)

热稳定(高达65℃),适合复杂模板

RT-LAMP

Hifair® V逆转录酶(11300ES)

兼容性强,速度快、合成产量高

一步法RT-PCR/qPCR

Hifair® Ultra逆转录酶(14604ES)

持续合成能力强,合成长度可达20 kb

RT-PCR/qPCR、RNA-seq、单细胞测序

注:以上所有的酶都有高浓度或无甘油版形式

 

下面重点介绍一款应用在RT-qPCR分子诊断试剂的逆转录酶:Hifair® V Reverse Transcriptase。该酶兼容性强,速度快、合成产量高,可耐受高达58℃的反应温度,非常适合用于RT-qPCR分子诊断试剂的开发。

 

Hifair® V逆转录酶性能展示

01

可耐受58℃反应温度,适合复杂RNA模板的逆转录

图3.将Hifair® V Reverse Transcriptase及进口品牌T*的逆转录酶分别在55℃及58℃下孵育30min检测残余酶活。结果显示Hifair® V Reverse Transcriptase在58℃下孵育30min仍能保持70%活性,远超进口品牌。

 

02

应用于RT-qPCR检出率优于其他品牌,检出范围:1 pg-1 μg

图4.以1 pg-1 μg(7个梯度)的293T细胞总RNA为模板,使用Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR(Cat#11142)、V*、T*进行逆转录,得到的cDNA进行qPCR定量分析。结果显示,11142ES灵敏度可达1 pg,检出率优于竞品。

 

翌圣逆转录酶突变体库

翌圣生物利用其ZymeEditor™双向分子酶理性设计与定向进化平台,持续推进逆转录酶的进化研究。至今,我们已经筛选出多种在不同应用场景下表现卓越的逆转录酶突变体,能够全面满足不同客户群体在多样化应用领域的需求。

 

表2.翌圣逆转录酶突变体选择指南

 

相关产品推荐

产品类型

产品名称

货号

高性能PCR单酶系列

Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase, 5 U/μL

10726ES

Hifair® V Reverse Transcriptase(200 U/μL)

11300ES

Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG),heat-labile​,1 U/μL

10303ES

Murine RNase Inhibitor(40 U/µL)  

10603ES

dNTP Mix(25 mM each)

10125ES

超洁净PCR单酶系列,超低宿主残留

Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL)

14314ES

Hifair UCF.ME® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

 

14608ES

UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL

14466ES

UCF.ME® Murine RNase Inhibitor(40 U/µL)

14672ES

可冻干PCR单酶系列

Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (5U/μL)

14316ES

Hifair® V Reverse Transcriptase, Glycerol-free(600 U/μL)

11301ES

Uracil DNA Glycosylase(UDG),Heat-Labile(1 U/μL,Glycerol-Free)

10707ES

Murine RNase Inhibitor(200 U/µL,Glycerol-free)

10703ES

 

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